Pierce Classic Magnetic IP/Co-IP Kit 经典磁性IP / Co-IP试剂盒
货号：88804
规格：40 reactions
价格：5746
产品类型：免疫印迹/组化
品牌：Thermo Fisher
| Thermo Scientific Pierce 经典磁珠法 IP/Co-IP 试剂盒使用不到 10 µg 的抗体和磁性分离器可高度有效且高效地对抗原和蛋白复合物进行免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (co-IP)。本免疫沉淀试剂盒使用高质量 Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 磁珠以及优化的缓冲液和灵活的实验方案以获得高得率 IP 或 co-IP，其可使用手动或自动磁性分离工具。优化的裂解/洗涤缓冲液优化了抗体-抗原的得率和高效结合以及 co-IP 相互作用。相对温和的低 pH 值洗脱缓冲液可使结合的免疫复合物与蛋白 A/G 分离。或者，内含的泳道标志物样品缓冲液提供了快速的变性洗脱，用于 IP 产物的直接 SDS-PAGE 分析。包括：Pierce 蛋白 A/G 磁珠、裂解/洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、中和缓冲液及上样缓冲液使用磁粒子进行免疫沉淀与微珠状琼脂糖 IP 非常相似，只是使用磁铁而非通过离心进行分离。首先将特异性抗体加入到样品中，形成一种免疫复合物，然后与磁珠结合。洗涤复合物以去除未结合的材料，低 pH 值洗脱缓冲液可使结合的免疫复合物与蛋白 A/G 分离。或者，包括泳道标志物样品缓冲液，用于使用变性条件进行解离或者用于 SDS-PAGE 分析的下游样品制备。该试剂盒包含 Thermo ScientificPierce 蛋白 A/G 磁珠（用于快速方便地对抗原进行磁性分离）以及优化的缓冲液（用于提高抗原得率）。使用磁力架手动从溶液中取出磁珠或者使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 仪器等仪器通过自动化操作从溶液中取出磁珠。通常已知更长时间的抗体-样品孵育（2 小时到过夜）通常在 IP 测定中具有更高的得率。人们通常认为这种更高的得率与增加的背景有关。我们的研究人员发现过夜抗体-样品结合然后使用 Pierce 经典磁珠法 IP/Co-IP 试剂盒进行免疫沉淀，通常会提高得率，但不会增加背景。因此，我们建议研究人员尽可能在至少 1 个小时内执行该结合步骤。方案总结：• 将细胞裂解物与 IP 抗体在室温下孵育 1 至 2 小时或在 4ºC 下过夜孵育。• 使抗原-抗体复合物与蛋白 A/G 磁珠在室温下结合 1 小时。•使用 IP 裂解/洗涤缓冲液洗涤微珠两次，并用纯化水洗涤一次。•洗脱抗原/抗体复合物。 |
| 特点： |
| -兼容—基于蛋白 A/G 重组蛋白的磁珠可确保与大多数一抗（无论来自小鼠还是兔）兼容-快速—免疫沉淀短至 30 分钟，以降低背景并提高瞬时蛋白复合物的捕获水平-洁净—固定您的抗体，以防止洗脱液受到污染-耐受性—在存在去污剂、低 pH 值缓冲液或常见质谱溶剂的情况下，不会浸出蛋白 A/G-高效—与其他磁珠相比，使用一半推荐体积的磁粒子进行免疫沉淀-便利—综合 Co-IP 试剂盒包含磁珠和完整免疫沉淀实验所需的所有必要缓冲液 |
| 数据： |
Co-immunoprecipitation of cyclin B and Cdk1The Thermo Scientific Pierce Protein A/G magnetic beads bind to Cdk1 antibody complexed with Cdk1. Cyclin B is bound to the Cdk1, and is captured along with its binding partner. The Classic Magnetic IP Kit co-immunoprecipitates (co-IP) cyclin B and Cdk1 with negligible backgroundU2OS cells were synchronized and samples were prepared as described in the figure above. The eluates were resolved by SDS-PAGE and either analyzed by Western blot (Panel A) for cyclin B or silver stained (Panel B). The Pierce Protein A/G beads were found to effectively co-IP cyclin B with a higher yield than Mag Sepharose™ Beads (GE Healthcare) and PureProteome™ Beads (Millipore), and equivalent yield to Dynabeads™ Beads (Life Technologies) (Panel A). The Pierce beads bound the same or more antibody than the other brands of Protein A and Protein G magnetic beads (Panel B). All beads were found to have negligible non-specific binding. |
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