Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit S-亚硝基化蛋白质印迹试剂盒
货号：90105
规格：40 reactions
价格：4645
产品类型：免疫印迹/组化
品牌：Thermo Fisher
| Thermo Scientific Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒可通过一个完整且易于使用的试剂盒灵敏检测蛋白 S-亚硝基半胱氨酸翻译后修饰。包括：• 半胱氨酸封闭试剂、还原剂、反应缓冲液、iodoTMT™ 标记试剂和抗 TMT 抗体Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒含有细胞裂解/反应缓冲液、巯基反应性封闭剂、还原剂、标记剂和检测单克隆抗体。每个试剂盒均含有足以标记 40 份（每份 100 µg）样品的试剂。与传统的 S-亚硝基化转换检测相似，未修饰的半胱氨酸首先使用巯基反应性化合物 (MMTS) 进行封闭。然后在 HENS 缓冲液中用抗坏血酸盐选择性还原 S-亚硝基化半胱氨酸，以用 iodoTMTzero™ 试剂进行特异性标记，该试剂与进行 S-亚硝基化的半胱氨酸硫醇不可逆地结合。使用抗 TMT 抗体便于进行 TMT™ 试剂修饰蛋白的检测。S-亚硝基化是一种翻译后修饰，可调节许多过程，包括细胞增殖、细胞凋亡、平滑肌松弛、神经递质释放和分化（参考 1）。在 S-亚硝基化过程中，一氧化氮自由基与半胱氨酸硫醇反应生成 S-NO 加合物，该加合物可改变蛋白活性。1998 年，Jaffrey 等人描述了生物素转换检测，该检测使用 HPDP-生物素测定体内和体外 S-亚硝基化（参考 2）。在该检测中，游离巯基被化学封闭，而亚硝基化半胱氨酸被选择性还原和生物素化，用于链霉素亲和素-HRP Western 印迹检测。然而，大多数细胞产生生物素化多肽，导致 Western 印迹分析期间产生假阳性信号。此外，生物素标记化学是可逆的，阻碍了通过质谱法进行 S-亚硝基化位点鉴别。Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒为改良形式的传统 S-亚硝基化转换检测提供了所有必要的试剂。使用非生物 iodoTMT™ 试剂而不是 HPDP-生物素完成标记，这使得 Western 印迹检测期间背景较低。除了通过 Western 印迹检测 S-亚硝基化蛋白外，固定化抗 TMT 树脂可用于选择性富集用 iodoTMT 试剂标记的 S-亚硝基化蛋白/肽。该工作流程允许使用质谱法进行 S-亚硝基化位点映射和多通路定量。 |
| 特点： |
| -特异性—优化的标记反应将使用 iodoTMT 试剂进行的 S-亚硝基半胱氨酸翻译后修饰测定转换为使用抗 TMT 抗体通过 Western 印迹进行的简单检测-更好的信噪比—使用非生物 iodoTMT 试剂而不是 HPDP-生物素进行标记，使得 Western 印迹检测期间背景较低-工作流程兼容—标记方法与替代分析方法（包括通过抗 TMT 树脂进行富集和通过质谱进行多通路定量）兼容-便利—一个试剂盒含有所有需要的试剂 |
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