Mitochondria Isolation Kit for Cultured Cells / 培养细胞线粒体分离试剂盒
货号：89874
规格：115 mL
价格：4260
产品类型：蛋白提取/纯化
品牌：Thermo Fisher
| Thermo Scientific 培养细胞线粒体分离试剂盒提供了一种通用的微量离心管方法，用于在约 40 分钟内从培养的哺乳动物细胞样本中分离完整的线粒体。线粒体分离通常是一个繁琐的过程，需要采用杜恩斯均质化法进行单一样品处理。线粒体分离试剂盒使用一种非机械、以试剂为基础的方法，可在大约 40 分钟内同时处理多份（6 份）培养细胞样本。使用专有制剂轻轻溶解培养的哺乳动物细胞沉淀，该制剂可在尽量避免损害完整性的情况下获得最高线粒体得率。产品说明描述了纯度与得率参数的优化指南。该试剂盒还提供一项优化的杜恩斯匀质化程序，可实现比以试剂为基础的方法高两倍的线粒体回收率。两种方法用一台台式微量离心机的不同离心速度分离线粒体和细胞质部分，并在大约 40 分钟内完成（细胞后收获）。一旦分离，线粒体可用于下游应用（如细胞凋亡、信号转导和代谢研究）以及促进线粒体蛋白质组学工作。 |
| 特点： |
| - 快速—可在约 40 分钟内（细胞收获后）从 20 百万个细胞中分离完整线粒体- 灵活—使用基于试剂的方法同时处理多份样品，或采用杜恩斯均质化方法获得可能的较高得率- 可优化—提供使用基于试剂的方法优化纯度和得率的指南- 台式-简便—在微量离心管中进行分离- 兼容—分离出的线粒体可用去污剂裂解或加以处理用于几乎任何下游应用（包括 2D 电泳） |
| 数据： |
| Protocol summary for isolation of mitochondria from cultured mammalian cellsReagent-based method Option B. Dounce homogenization method. A more purified preparation of mitochondria can be obtained by centrifuging at 3000 xginstead of 12,000 xg. 2D Western blot of superoxide dismutase (Mn-SOD) in isolated mitochondriaMitochondria were isolated from NIH3T3 cells using the Dounce homogenization protocol and re-suspended in 2D sample buffer (7M urea, 2M thiourea, 4% CHAPS, pH 3-10 carrier ampholytes, 50mM DTT). Proteins were resolved on a pH 3-10 IPG strip followed by 8-16% SDS-PAGE and then analyzed by Western blot for superoxide dismutase. Integrity of mitochondria extracted from cultured cellsC6 cells were extracted with Thermo Scientific Mitochondria Isolation Kit using the reagent-based method (A and B) or Dounce homogenization (C and D). Mitochondrial (M) and cytosolic (C) fractions were analyzed via Western blot for cytochrome C (A and C) or voltage-dependent anion channel (VDAC) (B and D). Thermo Scientific SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate (Part No. 34080) was used for detection. Results indicate that mitochondria remained intact. |
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