StemSpan™ NK Cell Generation Kit/StemSpan™NK细胞培养试剂盒
货号：09960
规格：100 mL
价格：11010
产品类型：造血干细胞培养
品牌：STEMCELL Technologies
| 该试剂盒可以在无血清和饲养细胞的条件下，使来源于脐带血（CB）和骨髓（BM）的CD34+造血干祖细胞（HSPCs），分化成NK细胞。Stemspan™淋巴祖细胞扩增添加物（10X）包含重组人细胞因子和其他配制的添加剂与Stemsan™SFEM II培养基配合使用，以及用Stemsan™淋巴细胞分化基质胶（100X）包被，可选择性促进人CB和BM样品中分离的CD34+细胞的扩增和分化。Stemspan™NK细胞分化添加物（100X）能够将淋巴祖细胞分化为NK细胞。 |
优点： |
| - 成分明确。无血清和饲养细胞，消除了血清和饲养细胞带来的可变性；- 性能优势。每一个脐带血来源的CD34+可生成约9000个NK细胞；- 方便使用。培养感兴趣的细胞时不需要再传代饲养细胞。 |
数据： |
| 图1 StemSpan™NK细胞生成流程第0天接种CB衍生的CD34细胞。培养3-4天后加满培养基，然后每3-4天进行半换液。在第14天，淋巴祖细胞阶段的细胞被收获并重新接种进一步分化为NK细胞。如图所示，重新接种后加满培养基，每3-4天进行半换液。注：UM 729只应添加到NK细胞分化培养基中，而不应添加到淋巴祖细胞增殖培养基中。图2 培养28天后CD56+NK细胞的频率和产量将CB衍生的CD34+细胞(新分离的或冷冻的)在Stemsan™NK细胞产生试剂盒中培养28天。收获细胞并通过流式细胞术分析(A，B)CD56和(A)Nkp46表达。通过光散射分布和活力染色排除死细胞。(B)28天存活的CD56+NK细胞的平均频率为77％，每输入一次CB衍生的CD34+细胞产生约9,000个CD56+细胞。显示的是95%置信区间（n=45 23新分离和22个冷冻CD34+细胞样品）的平均值。使用Stemspan™NK细胞生成试剂盒，将BM衍生的CD34+细胞分化为NK细胞。来自BM HSPCs的NK细胞的产率通常低于CB，平均每输入CD34+细胞平均约75(n＝3，数据未显示)。图3 培养28天后CD56+NK细胞的细胞表面标记表达将CB衍生的CD34+细胞在Stemsan™NK细胞生成试剂盒中培养28天。采集细胞并通过流式细胞术分析分化的细胞，表达CD56、NKP44、NKP30、NKG2D、CD94、CD16和KIR。KIR分子的染色是使用抗体、180704和HP-MA4的两个克隆的组合进行的，因为每个克隆识别出KIR分子的不同子集。图4 体外培养的NK细胞对K 562细胞株有明显的杀伤作用28天内从CB来源的CD34细胞中产生NK细胞。第28天收集细胞进行CD56染色，计数存活的CD56细胞。K562细胞用8 μM钙蛋白AM 37°C孵育1h后洗涤2次。CD56 NK细胞与10000个钙调素AM标记的K562靶细胞在U底96孔板中以5：1的比例供培养，37°C下共培养4h。使用EasySep™从成人外周血分离的NK细胞和的单核细胞作为阳性和阴性对照。外周血来源NK细胞用NK细胞分化添加物和SFEMⅡ过夜培养，外周血单核细胞仅在SFEMⅡ中过夜培养。为检测自发释放情况，设置只含钙调素AM标记的K562靶细胞的对照孔。用1%Triton™X-100处理K562细胞，测定其最大释放度。孵育后，以500×g离心5 min，将100μL的上清液转移到黑板上，用SPECTRAMAX微板阅读器进行分析(激发波长为485 nm/发射波长为530 nm)。结果表示为%特异性溶解：[(试验释放-自发释放)x 100]/(最大释放-自发释放)。CB CD34来源的NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性与外周血 NK细胞相似。平均值为±SD(CB CD34来源NK细胞：n=18，PB NK细胞和单核细胞：n=7)。 |
组成成分： |
| ▪StemSpan™ 淋巴祖细胞扩增添加物 (10X)（货号#09915）,5 mL▪StemSpan™淋巴祖细胞包被基质胶 (100X)（货号#09925）,250 µL▪StemSpan™ NK 细胞分化添加物(100X)（货号#09950）,500µL▪StemSpan™ SFEM II（货号#09605）,100 mL |
相关产品： |
▪ EasySep 免疫磁珠脐血CD34分离试剂盒（货号#17896） ▪EasySep 免疫磁珠CD34分离试剂盒（货号#17856） ▪ StemSpan SFEM (货号#09600/09650） ▪StemSpan SFEM II(货号#09605/09655） ▪eBioscience™ Calcein Violet 450 AM Viability Dye（货号#65-0854-39） |
技术参数 产品应用 细胞培养; 分化; 扩增
产品类型 添加物; 专业培养基
细胞类型 造血干细胞和祖细胞; NK细胞
产品线 StemSpan
适用物种 人
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