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ReproRNA™-OKSGM

2024-10-16

ReproRNA™-OKSGM

货号：05931,05930

规格：12 µg (1 µg/µL) ,1 kit

价格：19706,29616

产品类型：多能干细胞培养

品牌：STEMCELL Technologies

ReproRNA™-OKSGM是单链RNA复制子载体，包含五个重编程因子：OCT4，KLF4，SOX2，GLIS1和c-MYC，以及一个嘌呤霉素抗性基因（图1）。该RNA载体只需一个简单的转染步骤即可将体细胞（如：成纤维细胞）高效地重编程为诱导多能干（iPS）细胞（图2）。当与 ReproTeSR™重编程培养基一起使用时，可以在无饲养层条件下生成iPS细胞集落，且与基于饲养层的培养系统相比，具有更优异的集落形态和相似的重编程效率。以ReproRNA™培养生成的iPS 细胞集落表达未分化细胞的标志物，并保留正常基因组型，随后可使用TeSR™维持培养基进行培养，并进一步分化为所有三种胚层的细胞（图7）。

优点：

- 非病毒：非整合载体系统。- 自我复制载体：仅需单次转染。- 一体化：载体包含了所有重编程因子。- 高效：成纤维细胞的重编程效率与仙台病毒相当。

数据：

图1.ReproRNA™-OKSGM，一个单链RNA重编程载体原理图

图2. ReproRNA™-OKSGM重新编程的示意图第0天用ReproRNA™-OKSGM对体细胞进行转染，再在添加了嘌呤霉素的Advanced DMEM（AdvDMEM）中培养。转染并经历嘌呤霉素选择的5天后，让细胞在 ReproTeSR™培养基中渡过剩余的重编程诱导阶段，直至iPS细胞集落的出现。在转染后的前两周加入重组B18R蛋白，以抑制干扰素应答并提高细胞活性。通常情况下，到第20天时iPS细胞集落已经长大到可以被挑选，之后在TeSR™培养基中分选和增殖进行传代。图3. ReproRNA™-OKSGM载体可高效地重编程成纤维细胞以ReproRNA™-OKSGM载体转染真皮成纤维细胞，并在含饲养层（经辐照的小鼠胚胎成纤维细胞（iMEF）上含KOSR的hES细胞培养基）或无饲养层条件（ReproTeSR™以及Corning® Matrigel®）。成纤维细胞（第4代）的平均重编程效率为0.10 ± 0.03％（hES细胞培养基）和0.20 ± 0.01％（ReproTeSR™）。成纤维细胞在使用ReproRNA™和ReproTeSR™的重编程效率与报道的Sendai病毒的重编程效率相当1 （n ≥ 6;数据显示为平均值±SD）。

图 4. 以ReproRNA™-OKSGM载体和ReproTeSR™，在无滋养层条件下重编程形成优异的集落形态用ReproRNA™-OKGM产生iPS细胞集落的代表性图像，并在(A)以辐照的小鼠胚胎成纤维细胞(iMEFS)为滋养层的标准hES细胞培养基，或(B)在Matrigel上培养。与ES细胞培养基相比，用ReproTeSR™衍生的iPS细胞集落表现出更明确的边界、紧凑的形态和减少的分化。

图 5. ReproRNA™-OKSGM重编程形成的iPSC表达未分化细胞表面标记物ReproRNA™-OKSGM重编程形成的iPSC在mTeSR1中培养12代后表达未分化细胞表面标记(OCT4 和 TRA-1-60) （实心直方图代表样本，空心直方图代表二抗）。

图 6.使用 ReproRNA™-OKSGM 形成的iPSC拥有正常的核型使用 ReproRNA™-OKSGM 形成的iPSC在mTeSR™1中培养8代后保持正常的核型。图 7.使用 ReproRNA™-OKSGM 形成的iPSC拥有向三胚层细胞分化的潜力使用 ReproRNA™-OKSGM 形成的iPSC在mTeSR™1 中培养7代后形成三胚层细胞。通过流式分析使用STEMdiff™内胚层分化试剂盒分化形成的内胚层特异性，表明98.7%的细胞表CXCR4⁺SOX17⁺。通过STEMdiff™ 共胚层诱导培养基诱导形成的中胚层表达98.6%的Brachyury (T)。通过STEMdiff™神经诱导培养基诱导神经祖细胞表征外胚层的表达。CNS富集的NPC培养物表达PAX6（绿色），细胞核用DAPI染色。

组成成分：

▪ReproRNA™转染试剂▪ReproRNA™ 转染添加物▪重组 B18R (货号 #78075)

ReproRNA™-OKSGM

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